产品简介

衍生化是一种提高目标物质可检测性的有效方法，旨在增强检测器对特定分子的响应能力。在弱碱性溶液中，OPA与3-MPA能够与氨基酸的羰基和氨基反应，生成具有荧光特性的衍生物。这些衍生物在紫外光激发下会发射出比激发光波长更长的光，形成荧光。荧光强度与氨基酸浓度之间成正比关系，从而可计算出样品中氨基酸的含量。这种方法具有快速、准确、高灵敏度和广泛适用性的优点，非常适合生物医疗领域的应用。

产品信息

• 货号名称: SDK1010氨基酸衍生化试剂盒（OPA法，不含标准品）
• 规格: 25T/50T
• 储存条件: 2-8℃

注：如需更多信息，请联系网站负责人。

实验步骤

1. 流动相A的配制

取适量超纯水，在瓶中分别溶解流动相A1、A2和A3。将溶解后的流动相转移至1L容量瓶中，并用超纯水冲洗瓶壁1-2次，确保试剂完全溶解。最后，用超纯水将容量瓶定容至1L，混匀后过022μm有机相膜备用。

2. 流动相B的配制

取适量超纯水，溶解流动相B，并转移至1L容量瓶中。再用超纯水冲洗瓶壁1-2次，加入400mL的色谱级甲醇和400mL的色谱级Y腈，最后用超纯水定容至1L，混匀后过022μm有机相膜备用。

3. 除气处理

将配制好的流动相A和B超声处理30分钟，以去除溶剂中的气体，防止阻塞色谱柱，确保实验结果准确。

4. 标准溶液的配制

取一定量氨基酸标准品，用0.1MHCl溶解至100μg/mL或1mM的标准溶液，过022μm水相膜即可。

5. 衍生试剂的配制

取60mg试剂一，加入0.5mL试剂二、45mL试剂三和50μL试剂四，混匀并避光保存。此配制可得到约5mL的衍生化试剂，适用于25次手动衍生。实际操作中可根据需求调整配制量。

6. 液相色谱仪的设置

开启电脑和液相色谱仪，设置各模块开关（使用FLD检测器），装入C18色谱柱（46×250mm，耐水性≥90%）。在软件中设置柱温为35℃，流速1mL/min，激发波长（λex）340nm，发射波长（λem）450nm。根据洗脱程序调节，样品运行时间设定为60分钟，请保存设置。

7. 进样前的平衡处理

使用初始流动相（流动相A与流动相B=90:10）平衡色谱柱，平衡时间建议为30分钟或更久，直至基线稳定后方可进样。

8. 自动与手动衍生操作

若仪器支持自动衍生，吸取氨基酸标准溶液1μL，2μL衍生试剂（经022μm有机相膜处理），与2μL试剂三（经022μm水相膜处理）混合。若仪器不支持自动衍生，可选择手动衍生：取100μL氨基酸标准溶液，加入200μL衍生试剂和200μL试剂三，涡旋5次，每次30秒，静置1分钟后过022μm有机相膜，上样。

9. 实验空白对照

实验中需同时进行空白对照，使用相同的01MHCl重复上述步骤，以排除外部干扰因素。

检测结果示例

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