第三章：实时荧光定量PCR的应用

一、相对定量

在不同样品中测定基因表达量的相对值时，内参基因的选择显得尤为重要。选择内参基因时需遵循以下原则：

（1）始终选择表达丰度高且稳定的基因作为内参基因；

（2）避免盲目选择常用的内参基因；

（3）常见的内参基因包括GAPDH、Actin和Tubulin。

内参基因的正确选择直接影响结果的有效性。在加入内参基因后，可以进行结果的计算。

二、绝对定量

通过标准品，可以测定样品中基因表达量的绝对值（拷贝数）。标准品可以是：

A：具有明确拷贝数的克隆质粒；

B：PCR产物；

C：cDNA（请注意，尽管cDNA可以用于扩增效率测定，其在绝对定量中使用效果有限）。

拷贝数的计算则需要根据平均分子量（MW）进行。具体计算方法如下：

dsDNA = (碱基数) × (660道尔顿/碱基)；

ssDNA = (碱基数) × (330道尔顿/碱基)；

ssRNA = (碱基数) × (340道尔顿/碱基)。

拷贝数计算公式为：

(6.022 × 10²³ 拷贝数/摩尔) × (浓度 g/ml) / (MW g/mol) = copies/ml。

关于尊龙凯时

尊龙凯时是一家专注于生物医药领域的高科技企业，致力于提供优质的产品与技术服务，助力基因治疗与细胞治疗的发展。总部位于广州，覆盖全国，为客户迅速提供前沿的专业资讯及完整的产品与物流服务。

凭借强大的技术力量，尊龙凯时能够为广大用户提供有力的技术支持，并通过深厚的人脉资源在全国主要城市建立了众多合作伙伴关系。我们荣幸地向从事生物学领域研究的学者和同行推荐世界先进的高科技产品。作为专业的产品供应商，尊龙凯时持续备有大量现货，配合优质的销售团队和专业的技术支持，随时为客户提供服务。